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差速离心技术是分离细胞器的关键方法,其原理基于不同颗粒在离心力场中的沉降行为差异。

离心力与等效重力

离心过程中,高速旋转产生的离心力场等效于增强的重力场,称为“相对离心力”(RCF)。其计算公式为:

RCF = 1.118 \times 10^{-5} \times r \times (rpm)^2

其中 ( r ) 为离心半径(cm),( rpm ) 为转速。此力使颗粒按密度和大小分层。

粘性阻力与斯托克斯定律

颗粒沉降速度由离心力与粘性阻力平衡决定。斯托克斯公式修正后为:

v = \frac{2r^2 (\rho_p - \rho_f) \times RCF}{9\eta}

( r ):颗粒半径

( \rho_p, \rho_f ):颗粒与介质密度

( \eta ):介质粘度

大颗粒或高密度颗粒沉降更快,从而实现分级分离。

细胞器特性与雷诺数

雷诺数(Re):低 Re(<1)时粘性力主导,沉降平稳;细胞器因微小尺寸通常处于低 Re 状态。

膜疏水性及结构蛋白:影响有效密度(如膜脂降低密度,蛋白质增加密度)及形状,改变沉降速率。例如,线粒体的嵴结构可能增加阻力。

差速离心步骤

低速离心(500-1000×g):沉淀细胞核等大颗粒。

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